miRNAs的功能研究可分为loss-of-function和gain-of-function,就是通过过表达miRNAs和抑制内源miRNAs的作用来研究某个miRNA分子或某家族成员的生物学功能。
1、合成miRNAs分子瞬时转染:
采用瞬时转染的方法能够方便快捷地对miRNAs功能进行研究与分析,而且由于小分子的转染效率较高,对于gain-of-function的研究十分有效,但缺点是小分子在细胞内持续发挥作用的时间较短,对于较长时间才能出现的表型则需要反复转染miRNAs分子。
2、miRNA过表达载体的构建方法:
构建miRNAs表达载体,实现miRNAs在细胞中稳定过表达,能够弥补瞬时转染持续时间短的不足,过表达的方式通常包括pri-miRNA,pre-miRNA与成熟miRNAs形式,莱德尔技术使用的是以下两种方式:
(1)pri-miRNA(含侧翼序列)的表达形式,Ⅱ型启动子载体;
(2)pre-miRNA的表达形式,U6启动子载体。 |