基因的功能研究可分为loss-of-function和gain-of-function,即通过过表达该基因和抑制内源基因的表达的手段来研究某个基因的生物学功能。常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。
1、瞬时转染:
采用瞬时转染的方法能够方便快捷地对基因功能进行研究与分析,且基因表达水平高,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。
2、稳定转染(质粒转染):
1、常规细胞
服务流程:
(1)杀伤曲线绘制;
(2)转染质粒,铺板,用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆;
(3)qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。
2、特殊细胞(质粒转染)
(1)根据细胞特点、实验特点或实验需求,设计实验方案并与客户讨论确定实验方案;
(2)进行预实验,通过转染含有GFP报告基因的质粒确定最佳转染试剂,并优化转染条件;
(3)杀伤曲线绘制;
(4)转染质粒,铺板,用不同抗生素浓度筛选细胞单克隆;
(5)qPCR和WB检测稳定克隆的外源基因表达水平。